研究のタイプ: 医学／生物学の研究 (experimental study)

[超短電界ショックによる膜の透過亢進および細胞損傷] med./bio.

Membrane permeabilization and cell damage by ultrashort electric field shocks

著者: Pakhomov AG, Shevin R, White JA, Kolb JF, Pakhomova ON, Joshi RP, Schoenbach KH
掲載誌: Arch Biochem Biophys 2007; 465 (1): 109-118
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この研究はパルス幅がナノ秒の電界パルス（nsPEF; 60 ns、12 kV / cm）のばく露を受けた哺乳類の細胞に生じる変化を調べた。まず、nsPEFを与えると細胞膜の受動的電気コンダクタンスの大きな上昇が長時間持続して生じることが示された；これは、おそらく安定的なコンダクタンス細孔（CP）が開いたことによると思われる； CPは、Clイオンおよびアルカリ金属カチオンには透過性があるが、ヨウ化プロピジウム（PI）などの大きな分子には透過性がなかった；CPは徐々に再封鎖され、そのプロセスには数分かかり、透析された細胞およびATPやグルコースを含まない溶液でも観察された；長いnsPEFトレイン（最大200パルス）を受けた細胞は、重度かつ即時の壊死性変化（細胞膨張、細胞質の水疱様突起形成、細胞形質の顆粒形成）を示したが、ばく露後少なくとも30〜60分間はPIに対して不透過性のままであった；短いnsPEFトレイン後の受動的電気コンダクタンス増加、および長いnsPEFトレイン後の壊死的変化にはどちらも細胞タイプ依存性があり、GH3細胞よりもHeLaへの影響の方がはるかに弱かった；LaイオンおよびGdイオンは、nsPEFによる細胞膜のコンダクタンス上昇を（おそらくCPをブロックすることによって）有意に抑制し、強いばく露を受けた細胞を効果的に壊死から保護した。結論として、原形質膜の透過化は、nsPEFばく露を受けた細胞での壊死的変化が主な原因である、と報告している。

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研究目的（著者による）

This study was undertaken to analyze the effects of nanosecond pulsed electric fields exposure on cell membrane permeabilization in mural and human cells in vitro.

詳細情報

The effects of pulsed electric fields exposure on the mural and human cells were investigated in four different ion milieus and by the use of propidium iodide. The uptake of the fluorescent dye propidium iodide into the cell was measured as it is a sensitive marker of cell membrane integrity. The occurence of this dye in the cell indicates loss of membrane integrity. In this way mechanisms of changed membrane permeabilization under exposure to nanosecond pulsed electric fields should be further characterized.

影響評価項目

ばく露

ばく露 パラメータ
ばく露1: 10–50 kHz
Modulation type: pulsed
ばく露時間: up to 200 pulses

ばく露1

主たる特性
周波数 10–50 kHz
タイプ
  • electric field
波形
  • pulsed
ばく露時間 up to 200 pulses
Modulation
Modulation type pulsed
Pulse width 60 ns
Pulse type rectangular
ばく露装置
ばく露の発生源／構造
  • pair of tungsten electrodes with a diameter of 0.125 mm each and a gap of 0.31 mm
Distance between exposed object and exposure source 5 µm
ばく露装置の詳細 cells placed in the middle of the electrode gap
Sham exposure A sham exposure was conducted.
パラメータ
測定量 値 種別 Method Mass 備考
電界強度 12 kV/cm - 計算値 - -
参照 - - 計算値 - U = 540 - 580 V

ばく露を受けた生物:

方法 影響評価項目／測定パラメータ／方法

研究対象とした生物試料:
調査の時期:
  • ばく露前
  • ばく露中
  • ばく露後

研究の主なアウトカム（著者による）

After short nanosecond pulsed electric fields exposure an increase in membrane conductance was observed in the cells and necrotic changes appeared after the exposure to long nanosecond pulsed electric fields. Both parameters were cell type-dependent. They were much weaker in human cervical carcinoma cells than in murine pituitary cells.
No propidium iodide uptake was observed by either cell line. Lanthanum and gadolinium ions significantly inhibited the nanosecond pulsed electric fields-induced membrane conductance increase, and protected the exposed cells from developing necrosis.

研究の種別:

研究助成

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